les radicaux libres et les antioxydants
Antioxydant Et Les Radicaux Libres De Balayage Propriétés De Douze
Plantes médicinales traditionnellement utilisées
introduction
Les espèces réactives de l'oxygène (ROS) constituent une classe entière de
molécules hautement réactives issues du métabolisme de
oxygène. ROS, y compris les radicaux superoxydes, hydroxyle
les radicaux et le peroxyde d'hydrogène sont souvent générés sous forme de
sous-produits de réactions biologiques ou de bactéries exogènes
les facteurs. In vivo, certaines de ces ROS jouent un rôle positif dans
physiologie cellulaire; Cependant, ils peuvent également causer de grandes
dommages aux membranes cellulaires et à l'ADN, induisant une oxydation
qui provoque la peroxydation des lipides membranaires, diminué
la fluidité membranaire et les mutations de l'ADN conduisant au cancer,
maladies dégénératives et autres (1-4).
Les cellules de mammifères possèdent une défense élaborée
mécanismes de désintoxication radicale. Clé métabolique
la superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT),
et la glutathion peroxydase (GPX), qui détruisent les toxines
les peroxydes. En plus des enzymes antioxydantes, non enzymatiques
molécules, y compris la thiorédoxine, les thiols et
la liaison disulfure joue un rôle important dans les antioxydants
systèmes de défense. Certains des composés sont d'un
la nature exogène et sont obtenus à partir des aliments, tels que -
tocophérol, - carotène et l' acide ascorbique, et notamment
éléments de micronutriments comme le zinc et le sélénium (5). Si
les constituants cellulaires ne sont pas efficacement libérés
radicaux, ils conduisent à des maladies telles que décrites
au dessus de.
Médicaments / préparations à base d'antioxydants pour
la prévention et le traitement de maladies complexes comme
athérosclérose, accident vasculaire cérébral, diabète, maladie d’Alzheimer, et
le cancer est apparu au cours des 3 dernières décennies (6). Ce
a suscité de nombreuses recherches dans le domaine des ressources naturelles.
les antioxydants. Par la suite, une tendance mondiale vers
l'utilisation de composés phytochimiques naturels présents dans les baies,
thé, herbes, graines oléagineuses, haricots, fruits et légumes a
augmenté (7-9).
Plusieurs herbes et épices ont été rapportés
activité antioxydante, y compris le romarin, la sauge, le thym,
noix de muscade, curcuma, poivre blanc, piment rouge, gingembre et
plusieurs extraits de plantes médicinales chinoises (10-13). le
la majorité des composés antioxydants actifs sont
Turk J Biol
30 (2006) 177-183
© T.BÜTAK
177
Antioxydant Et Les Radicaux Libres De Balayage Propriétés De Douze
Plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
Farrukh AQIL, Iqbal AHMAD, Zafar MEHMOOD
1 Département de microbiologie agricole, Faculté des sciences agricoles, Université musulmane d'Aligarh, Aligarh-202002, INDE
2 Compagnie pharmaceutique Himalaya, Najaf Garh Road, New Delhi-110015, Inde
Reçu le 01.06.2006
Résumé: Les extraits bruts méthanoliques de 12 plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées ont été sélectionnés pour leur antioxydant et
propriétés d'élimination des radicaux libres en utilisant le - tocophérol et l'hydroxytoluène butylé (BHT) comme antioxydants classiques. Antioxydant
l'activité a été mesurée par dosage du thiocyanate ferrique (FTC) et comparée à la méthode à l'acide thiobarbiturique (TBA). Radical libre
l'activité de balayage a été évaluée en utilisant des radicaux diphényl picryl hydrazyle (DPPH). L’activité antioxydante globale de Lawsonia inermis
Ocimum Sanctum, Cichorium Intybus, Piper Cubeba, Punica granatum, Allium, suivaient en ordre décroissant.
sativum, Delonix regia, Terminalia chebula, Terminalia bellerica, Mangifera indica, Camellia sinensis et Trigonella foenum-graecum.
Sept plantes, à savoir Terminalia chebula, Mangifera indica, Terminalia bellerica, Punica granatum, Ocimum sanctum, Cichorium
Intybus et Camellia sinensis ont montré une forte activité de piégeage des radicaux libres avec la méthode DPPH. Analyse phytochimique de la plante
des extraits ont indiqué la présence de composés phytocomposants majeurs, notamment des composés phénoliques, des alcaloïdes, des glycosides, des flavonoïdes et des tanins. le
les concentrations phénoliques dans les plantes ci-dessus allaient de 28,66 à 169,67 mg / g d'extrait sec de plante. Une corrélation équitable entre
une activité antioxydante / piégeant les radicaux libres et un contenu phénolique ont été observés chez 9 plantes; cependant, chez 3 plantes (Piper cubeba,
Lawsonia inermis et Trigonella foenum-graecum), aucune relation de ce type n’a été observée. Les extraits de plantes testés ont montré des résultats prometteurs
antioxydant et activité de piégeage des radicaux libres, justifiant ainsi leur utilisation traditionnelle.
Mots clés: Plante médicinale, activité antioxydante, activité de piégeage des radicaux libres, composés phytopharmaceutiques, composés phénoliques
flavonoïdes, isoflavones, flavones, anthocyanines,
les coumarines, les lignanes, les catéchines et les isocatéchines. Dans
Outre les composés ci-dessus présents dans les aliments naturels,
les vitamines C et E, carotene et sont tocopherol
connu pour posséder un potentiel antioxydant (14-16). Un direct
relation entre l'activité antioxydante et phénolique
la teneur en extraits de plantes a été rapportée (16,17).
Des études épidémiologiques ont montré que la consommation
des aliments et des boissons riches en contenu phénolique peuvent
réduire le risque de maladie cardiaque (18).
Beaucoup de plantes médicinales indiennes sont considérées comme potentielles
sources de composés antioxydants. Dans certains cas, leurs
les constituants actifs sont connus. Terminalia chebula, T.
bellerica, T. muelleri et Phyllanthus emblica, tous
qui ont une activité antioxydante, ont montré une forte teneur en
les composés phénoliques comme l'acide gallique (19,20). Inversement, le
Activité antioxydante de Hemidesmus indicus, Cichorium
intybus, Withania somnifera, Ocimum sanctum,
Mangifera indica et Punica granatum, déterminés par
plusieurs méthodes, a été peu documentée (19-23).
Il y a une quête accrue d'obtention naturelle
antioxydants avec des actions à large spectre. La majorité des
la riche diversité des plantes médicinales indiennes n’a pas encore été
scientifiquement évalué pour de telles propriétés. En outre, le
relation entre le contenu phénolique et l'antioxydant
l'activité n'est généralement pas examinée chez les plantes médicinales indiennes.
Parmi les 12 plantes médicinales ci-dessus qui sont couramment
utilisé dans le système de médecine indien, Ayurveda, Siddha et
Unani ont été sélectionnés pour l'étude. Nous avons déjà évalué
ces plantes pour leur activité antimicrobienne à large spectre
(24,25). Dans ce rapport, nous avons étudié le méthanolique brut
extraits de ces plantes pour leur potentiel antioxydant
activité avec l'acide thiobarbiturique (TBA), le thiocyanate ferrique
(FTC), et 1, 1, radical diphényl picryl hydrazyle (DPPH)
méthodes de nettoyage.
Matériaux et méthodes
Préparation d'extraits de plantes brutes
Les plantes testées ont été collectées localement ou obtenues de la
Compagnie pharmaceutique Himalaya, New Delhi-15. Toute la plante
matériaux ont ensuite été identifiés par le ministère de la
Botanique, Université musulmane d'Aligarh (AMU), Aligarh.
Des spécimens de référence de ces plantes ont été déposés dans
département de microbiologie agricole, AMU, Aligarh.
Environ 800 g de matière végétale séchée et broyée ont été trempés
dans 2,5 l de méthanol à 98% pendant 8 à 10 jours, en remuant tous les 18 jours
h en utilisant une tige de verre stérile. L'extrait final a été passé
sur le papier filtre Whatman n ° 1 (Whatman Ltd.,
Angleterre). Le filtrat obtenu a été concentré sous
sous vide sur un évaporateur rotatif à 40 ºC et stocké à 4
¡C pour une utilisation ultérieure. L’extrait brut a été obtenu par
dissoudre une quantité connue d'extrait sec dans 98%
méthanol pour obtenir une solution mère de 40 mg / ml
concentrations.
Dosage d'antioxydant
L'activité antioxydante de chaque extrait de plante était
testé avec le thiocyanate ferrique (FTC) et
méthodes de l'acide thiobarbiturique (TBA). La méthode FTC était
utilisé pour mesurer la quantité de peroxyde au début
de peroxydation lipidique, dans laquelle le peroxyde va réagir avec
chlorure ferreux et forment des ions ferriques. Les ions ferriques seront alors
unir avec thiocyanate d'ammonium et produire ferrique
thiocyanate. La substance est rouge et la couleur plus dense est
indicatif d'une absorbance plus élevée. La méthode TBA
mesure les radicaux libres présents après l'oxydation du peroxyde.
a) Méthode au thiocyanate ferrique (FTC)
La méthode standard décrite par Kikuzaki et
Nakatani (12) a été utilisé. Un mélange de 4,0 mg de plante
extraire dans 4 ml d'éthanol absolu, 4,1 ml à 2,52%
acide linolénique dans l’éthanol absolu, 8,0 ml de 0,05 M
tampon phosphate (pH 7,0) et 3,9 ml d’eau ont été
placé dans un flacon avec un bouchon à vis, puis placé dans un endroit sombre
four à 40 ° C. 9,7 ml à 0,1 ml de cette solution ont été ajoutés
ml d'éthanol à 75% et 0,1 ml d'ammonium à 30%
thiocyanate. Précisément 3 min après l'ajout de 0,1 ml
de chlorure ferreux 0,02 M dans HCl à 3,5% à la réaction
mélange, l'absorbance de la couleur rouge a été mesurée à
500 nm toutes les 24 h jusqu'au lendemain de l'absorbance de
le contrôle a atteint son maximum. Hydroxytoluène butylé
(BHT) et ont été utilisés comme tocopherol contrôles positifs,
alors qu’un mélange sans échantillon de plante était utilisé comme
contrôle négatif.
b) Méthode à l'acide thiobarbiturique (TBA)
La méthode d'Ottolenghi (26) a été suivie. Deux
millilitres d'acide trichloroacétique à 20% et 2 ml de 0,67%
De l'acide 2-thiobarbiturique a été ajouté à 1 ml d'échantillon
solution préparée avec la méthode FTC. Le mélange
a été placé dans un bain d’eau bouillante et après refroidissement était
centrifugé à 3000 tr / min pendant 20 min. Absorbance de
le surnageant a été mesuré à 552 nm. Antioxydant
l'activité était basée sur l'absorbance le dernier jour de
la méthode FTC.
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
178
Essai de balayage des radicaux libres
L’activité de nettoyage des radicaux libres DPPH par
différents extraits de plantes ont été déterminés en fonction de la
méthode rapportée par Gyamfi (27). Cinquante microlitres du
extrait de plante dans du méthanol, donnant 100 µg / ml dans chaque
réaction, a été mélangé avec 1 ml de DPPH 0,1 mM dans
solution de méthanol et 450 µl de tampon Tris-HCl 50 mM
(pH 7,4). Du méthanol (50 µl) seulement a été utilisé comme
contrôle expérimental. Après 30 min d'incubation en chambre
température, la réduction du nombre de DPPH libre
les radicaux ont été mesurés en lisant l'absorbance à 517
nm. Le BHT et le ocop- tocophérol ont été utilisés comme témoins. le
le pourcentage d'inhibition a été calculé à partir des éléments suivants
équation:
% D'inhibition = [absorbance du contrôle Ð absorbance
de l' échantillon de test / Absorbance de contrôle] 100
Analyse phytochimique
Analyse phytochimique des principaux phytoconstituants
des extraits de plantes a été entreprise en utilisant la norme
méthodes qualitatives (tests de couleur et / ou CCM) telles que décrites
plus tôt (24).
Analyse du composé phénolique total
Les quantités de composés phénoliques dans l’indien sélectionné
extraits de plantes médicinales ont été déterminés avec Folin-
Réactif Ciocalteu selon la méthode de Spanos et
Wrolstad (28), modifié par Lister et Wilson (29). À
50 ml de chaque échantillon (3 répétitions), 2,5 ml de 10%
dilution du réactif Folin-Ciocalteu et 2 ml de Na 2 CO 3
(7,5%, p / v) ont été ajoutés et le mélange résultant a été
incubé à 45 ° C pendant 15 min. L'absorbance de tous
les échantillons ont été mesurés à 765 nm en utilisant un appareil Spectronic
20D + . Les résultats ont été exprimés en milligrammes d'acide gallique.
équivalent par gramme de poids sec (mg GAE / g ps).
Résultats et discussion
Espèces réactives de l'oxygène (ROS), des deux
sources endogènes et exogènes, peuvent être impliquées dans
les étiologies de diverses maladies humaines telles que
artériosclérose, lésion ischémique, cancer et
maladies neurodégénératives, ainsi que dans les processus
comme l'inflammation et le vieillissement (5,30,31). Il y a des preuves
que les antioxydants indigènes peuvent être utiles dans la prévention
les conséquences délétères du stress oxydatif et là
est de plus en plus intéressé par le biochimique protecteur
fonctions des antioxydants naturels contenus dans les épices,
herbes et plantes médicinales (32,33). Notre attention a
se sont concentrés, en particulier, sur les parties de 12
utilisé des plantes médicinales indiennes.
Les activités antioxydantes des extraits de plantes ont été
mesurée par la méthode FTC et comparée à la
Méthode TBA à une concentration de 0,02% en méthanol
solutions. Les extraits de plantes testés ont montré une faible
les valeurs d’absorbance, qui indiquaient un niveau élevé de
activité antioxydante. Aucun des extraits de plantes montrés
valeurs d'absorbance supérieures aux contrôles négatifs
(sans extraits de plantes) à la fin des deux méthodes,
indiquant la présence d'une activité antioxydante. cependant,
tous les extraits de plantes ont montré une forte activité antioxydante
tel que déterminé par les méthodes FTC et TBA,
surpassant l'activité du commercial standard
antioxydants, alpha-tocophérol et hydroxy butylé
toluène (figures 1 à 4).
Les extraits de Delonix regia (fleurs), Terminalia
bellerica (fruits), Terminalia chebula (fruits), Ocimum
sanctum (feuilles) et Camellia sinensis (feuilles) et certains
d'autres plantes ont exercé une bonne activité antioxydante par divers
méthodes. L'activité antioxydante détectée avec le TBA
la méthode était supérieure à celle détectée avec le FTC
méthode. Cela pourrait suggérer que la quantité de peroxyde
au stade initial de la peroxydation lipidique était inférieure à la
quantité de peroxyde au stade secondaire. En outre,
le produit secondaire était beaucoup plus stable pendant une période
de temps.
Les radicaux libres ont été impliqués dans de nombreuses maladies
conditions, les plus importantes étant les radicaux superoxydes,
les radicaux hydroxy, les radicaux peroxyle et l'oxygène simple.
Les médicaments à base de plantes contenant des agents anti-radicaux libres sont
gagner en importance dans le traitement de ces maladies. Beaucoup de plantes
extraits présentent des propriétés antioxydantes efficaces en raison de
leurs phytoconstituants, y compris les composés phénoliques (34). dans le
expérience actuelle, extraits méthanoliques de 12 plantes
ont été évalués pour leur activité de piégeage des radicaux libres
en utilisant le dosage radical DPPH. Réduction des radicaux DPPH
peut être observé par la diminution de l'absorbance à 516
nm. Différents extraits de plantes ont réduit les radicaux DPPH
significativement. Valeurs de pourcentage de décoloration de DPPH
Les radicaux sont indiqués dans le tableau 1. Sur les 12 plantes testées, 7
plantes, à savoir Mangifera indica, Punica granatum,
Terminalia bellerica, Terminalia chebula, Cichorium
intybus, Ocimum sanctum et Camellia sinensis ont montré
plus de 70% de décoloration. L'activité de Trigonella
foenum graecum (57%) était au pair par rapport à
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
179
les antioxydants commerciaux - tocophérol (58%) et
toluène butylé (49%), tandis que l'extrait de
Allium sativum a montré une activité négligeable.
Quelques variations dans l'étendue de l'extrait d'antioxydant
ont été observés pour chaque type de test utilisé dans ce
étude. Les extraits de Terminalia bellerica, Terminalia
chebula et Mangifera indica avaient un bon radical DPPH
activité de piégeage, mais faible peroxydation lipidique, tandis que le
extraits de Camellia sinensis, Cichorium intybus, et
Ocimum sanctum avait un potentiel antioxydant relativement élevé
selon la méthode FTC. Ces différences peuvent être
en raison de leurs différents mécanismes antioxydants; cependant,
dans certains des extraits de plantes ci-dessus, la substance active
les constituants sont connus, tels que l'acide gallique (T. chebula)
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
180
Journées
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Absorbance à 500 nm
0.0
0,1
0,2
0,3
0.4
0.5
0.6
Delonix regia
Allium sativum
Piper Cubeba
Mangifera indica
Trigonella f. graecum
Punica granatum
0 1 2 3 4 5 6 7 8
0
1
2
3
Contrôle négatif
BHT
- tocophérol
Figure 1. Propriétés antioxydantes d'extraits de plantes déterminées par la méthode FTC.
Journées
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Absorbance à 500 nm
0.0
0,1
0,2
0,3
0.4
0.5
0.6
Lawsonia inermis
Terminalia bellerica
Terminalia chebula
Camellia Sinensis
Cichorium intybus
Ocimum sanctum
0 1 2 3 4 5 6 7 8
0
1
2
3
Contrôle négatif
BHT
Ocop- tocophérol
Figure 2. Propriétés antioxydantes d'extraits de plantes déterminées par la méthode FTC.
et les catéchines (Camellia sinensis). Nos conclusions sur le
l'activité antioxydante des plantes médicinales en corrélation avec
rapports de tiers (19-23).
Une corrélation équitable entre le contenu phénolique total et
une activité antioxydante a été observée chez 9 des 12 plantes,
alors qu'aucune relation directe n'a pu être détectée dans Piper
cubeba, Lawsonia inermis et Trigonella foenumgraecum
extraits. Ces observations indiquent clairement une
lien étroit entre les composés phénoliques et l'activité antioxydante;
cependant, en raison de la diversité phytochimique du
composés phytocomposants antioxydants, la variation ci-dessus est
attendu.
L'analyse phytochimique des extraits bruts
a indiqué la présence de phytocomposés majeurs,
composés phénoliques, alcaloïdes, glycosides, flavonoïdes et
tanins (tableau 1), qui pourraient avoir été responsables de
l'activité antioxydante observée. Nos résultats plus loin
soutenir l'idée que certains Indiens utilisaient traditionnellement
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
181
Absorbance à 532 nm le dernier jour de la méthode FTC
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Delonix regia
Allium sativum
Piper Cubeba
Mangifera indica
Punica granatum
Trigonella f. graecum
BHT
Ocop- tocophérol
Eau
Figure 3. Activités antioxydantes des extraits de plantes déterminées par la méthode TBA.
Absorbance à 532 nm le dernier jour de la méthode FTC
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Lawsonia inermis
Terminalia bellerica
Terminalia chebula
Camellia Sinensis
Cichorim Intybus
Ocimum sanctum
BHT
Ocop- tocophérol
Eau
Figure 4. Activités antioxydantes des extraits de plantes déterminées par la méthode TBA.
les plantes médicinales sont des sources prometteuses de potentiel
les antioxydants. Une étude plus approfondie visera à isoler et à
identifier les substances responsables de l'antioxydant
activité des extraits de plantes, qui peuvent être exploités
dans des formulations à base de plantes.
Remerciements
Nous sommes reconnaissants au Dr. S. Farooq, Directeur du
Himalaya Drug Company, New Delhi, pour avoir fourni certaines
des matériaux végétaux et le président de la
Département de microbiologie agricole pour sa passion
intérêt pour ce travail. Nous sommes également reconnaissants à UGC, New
Delhi, pour un soutien financier sous forme de recherche majeure
projet n ° F.3-58 / 2002 (SR-II).
Auteur correspondant:
Iqbal AHMAD
Département de microbiologie agricole,
Université musulmane d'Aligarh,
Aligarh, 202002 - INDE
E-mail: iqbalahmad8@yahoo.co.in
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
182
Tableau 1. Activité de piégeage des radicaux libres des plantes médicinales indiennes, déterminée par la méthode DPPH, et teneur totale en phénol.
S. Nom de la plante / Famille Partie commune% Décoloration * Phytocomposés ** Total phénolique
Nom utilisé ± SD détecté contenu ± SD
1. Ampoule Allium sativum L. Lesan 7,97 ± 1,09 P, T 28,66 ± 2,52
(Alliaceae)
2. Camellia sinensis L. Feuilles de thé 69,95 ± 3,62 P, G, S 163,33 ± 7,37
(Theaceae)
3. Cichorium intybus L. Racines de chicorée 73,34 ± 4,87 A, P, F, G, T 76,83 ± 8,75
(Composée)
4. Delonix regia Gamble. Fleurs Gulmohar 71,93 ± 3,86 A, P, F, G 169,67 ± 11,23
(Légumineuses)
5. Lawsonia inermis L. Heena feuilles 67,67 ± 5,48 A, P, G, S 38,67 ± 4,51
(Lythraceae)
6. Mangifera indica L. Feuilles d'Aam 78,14 ± 3,63 F, G 135,00 ± 9,54
(Anacardiaceae)
7. Ocimum sanctum L. Feuilles de Tulsi 73,70 ± 5,87 P, G, S 80,00 ± 8,18
(Labiatae)
8. Piper cubeba L. Graines de chini Kabab 66,20 ± 3,20 P, F 42,83 ± 3,75
(Piperaceae)
9. Punica granatum L. Anar croûte 75,50 ± 3,90 A, P, F, G 122,00 ± 6,24
(Punicaceae)
10. Terminalia bellerica Roxb. Fruits Bahera 76,29 ± 3,06 P, F, G, S, T 111,67 ± 19,29
(Combretaceae)
11. Terminalia chebula Retz. Harir Fruit 85,36 ± 2,44 P, G, S 166,33 ± 18,01
(Combretaceae)
12. Trigonella foenum-graecum L. Feuilles de Methi 57,45 ± 2,44 A, F, G 74,33 ± 5,13
(Légumineuses)
13. BHT ---- ---- 49.28 ± 2.10
14. ocop- tocophérol ---- ---- 58,16 ± 4,13
* Clé Phytocomposés: A, Alcaloïdes; P, phénols; F, flavonoïdes; G, glycosides, S, saponines; T, tanins
** mg / g d'extraits de plantes sèches
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
183
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Antioxydant Et Les Radicaux Libres De Balayage Propriétés De Douze
Plantes médicinales traditionnellement utilisées
introduction
Les espèces réactives de l'oxygène (ROS) constituent une classe entière de
molécules hautement réactives issues du métabolisme de
oxygène. ROS, y compris les radicaux superoxydes, hydroxyle
les radicaux et le peroxyde d'hydrogène sont souvent générés sous forme de
sous-produits de réactions biologiques ou de bactéries exogènes
les facteurs. In vivo, certaines de ces ROS jouent un rôle positif dans
physiologie cellulaire; Cependant, ils peuvent également causer de grandes
dommages aux membranes cellulaires et à l'ADN, induisant une oxydation
qui provoque la peroxydation des lipides membranaires, diminué
la fluidité membranaire et les mutations de l'ADN conduisant au cancer,
maladies dégénératives et autres (1-4).
Les cellules de mammifères possèdent une défense élaborée
mécanismes de désintoxication radicale. Clé métabolique
la superoxyde dismutase (SOD), la catalase (CAT),
et la glutathion peroxydase (GPX), qui détruisent les toxines
les peroxydes. En plus des enzymes antioxydantes, non enzymatiques
molécules, y compris la thiorédoxine, les thiols et
la liaison disulfure joue un rôle important dans les antioxydants
systèmes de défense. Certains des composés sont d'un
la nature exogène et sont obtenus à partir des aliments, tels que -
tocophérol, - carotène et l' acide ascorbique, et notamment
éléments de micronutriments comme le zinc et le sélénium (5). Si
les constituants cellulaires ne sont pas efficacement libérés
radicaux, ils conduisent à des maladies telles que décrites
au dessus de.
Médicaments / préparations à base d'antioxydants pour
la prévention et le traitement de maladies complexes comme
athérosclérose, accident vasculaire cérébral, diabète, maladie d’Alzheimer, et
le cancer est apparu au cours des 3 dernières décennies (6). Ce
a suscité de nombreuses recherches dans le domaine des ressources naturelles.
les antioxydants. Par la suite, une tendance mondiale vers
l'utilisation de composés phytochimiques naturels présents dans les baies,
thé, herbes, graines oléagineuses, haricots, fruits et légumes a
augmenté (7-9).
Plusieurs herbes et épices ont été rapportés
activité antioxydante, y compris le romarin, la sauge, le thym,
noix de muscade, curcuma, poivre blanc, piment rouge, gingembre et
plusieurs extraits de plantes médicinales chinoises (10-13). le
la majorité des composés antioxydants actifs sont
Turk J Biol
30 (2006) 177-183
© T.BÜTAK
177
Antioxydant Et Les Radicaux Libres De Balayage Propriétés De Douze
Plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
Farrukh AQIL, Iqbal AHMAD, Zafar MEHMOOD
1 Département de microbiologie agricole, Faculté des sciences agricoles, Université musulmane d'Aligarh, Aligarh-202002, INDE
2 Compagnie pharmaceutique Himalaya, Najaf Garh Road, New Delhi-110015, Inde
Reçu le 01.06.2006
Résumé: Les extraits bruts méthanoliques de 12 plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées ont été sélectionnés pour leur antioxydant et
propriétés d'élimination des radicaux libres en utilisant le - tocophérol et l'hydroxytoluène butylé (BHT) comme antioxydants classiques. Antioxydant
l'activité a été mesurée par dosage du thiocyanate ferrique (FTC) et comparée à la méthode à l'acide thiobarbiturique (TBA). Radical libre
l'activité de balayage a été évaluée en utilisant des radicaux diphényl picryl hydrazyle (DPPH). L’activité antioxydante globale de Lawsonia inermis
Ocimum Sanctum, Cichorium Intybus, Piper Cubeba, Punica granatum, Allium, suivaient en ordre décroissant.
sativum, Delonix regia, Terminalia chebula, Terminalia bellerica, Mangifera indica, Camellia sinensis et Trigonella foenum-graecum.
Sept plantes, à savoir Terminalia chebula, Mangifera indica, Terminalia bellerica, Punica granatum, Ocimum sanctum, Cichorium
Intybus et Camellia sinensis ont montré une forte activité de piégeage des radicaux libres avec la méthode DPPH. Analyse phytochimique de la plante
des extraits ont indiqué la présence de composés phytocomposants majeurs, notamment des composés phénoliques, des alcaloïdes, des glycosides, des flavonoïdes et des tanins. le
les concentrations phénoliques dans les plantes ci-dessus allaient de 28,66 à 169,67 mg / g d'extrait sec de plante. Une corrélation équitable entre
une activité antioxydante / piégeant les radicaux libres et un contenu phénolique ont été observés chez 9 plantes; cependant, chez 3 plantes (Piper cubeba,
Lawsonia inermis et Trigonella foenum-graecum), aucune relation de ce type n’a été observée. Les extraits de plantes testés ont montré des résultats prometteurs
antioxydant et activité de piégeage des radicaux libres, justifiant ainsi leur utilisation traditionnelle.
Mots clés: Plante médicinale, activité antioxydante, activité de piégeage des radicaux libres, composés phytopharmaceutiques, composés phénoliques
flavonoïdes, isoflavones, flavones, anthocyanines,
les coumarines, les lignanes, les catéchines et les isocatéchines. Dans
Outre les composés ci-dessus présents dans les aliments naturels,
les vitamines C et E, carotene et sont tocopherol
connu pour posséder un potentiel antioxydant (14-16). Un direct
relation entre l'activité antioxydante et phénolique
la teneur en extraits de plantes a été rapportée (16,17).
Des études épidémiologiques ont montré que la consommation
des aliments et des boissons riches en contenu phénolique peuvent
réduire le risque de maladie cardiaque (18).
Beaucoup de plantes médicinales indiennes sont considérées comme potentielles
sources de composés antioxydants. Dans certains cas, leurs
les constituants actifs sont connus. Terminalia chebula, T.
bellerica, T. muelleri et Phyllanthus emblica, tous
qui ont une activité antioxydante, ont montré une forte teneur en
les composés phénoliques comme l'acide gallique (19,20). Inversement, le
Activité antioxydante de Hemidesmus indicus, Cichorium
intybus, Withania somnifera, Ocimum sanctum,
Mangifera indica et Punica granatum, déterminés par
plusieurs méthodes, a été peu documentée (19-23).
Il y a une quête accrue d'obtention naturelle
antioxydants avec des actions à large spectre. La majorité des
la riche diversité des plantes médicinales indiennes n’a pas encore été
scientifiquement évalué pour de telles propriétés. En outre, le
relation entre le contenu phénolique et l'antioxydant
l'activité n'est généralement pas examinée chez les plantes médicinales indiennes.
Parmi les 12 plantes médicinales ci-dessus qui sont couramment
utilisé dans le système de médecine indien, Ayurveda, Siddha et
Unani ont été sélectionnés pour l'étude. Nous avons déjà évalué
ces plantes pour leur activité antimicrobienne à large spectre
(24,25). Dans ce rapport, nous avons étudié le méthanolique brut
extraits de ces plantes pour leur potentiel antioxydant
activité avec l'acide thiobarbiturique (TBA), le thiocyanate ferrique
(FTC), et 1, 1, radical diphényl picryl hydrazyle (DPPH)
méthodes de nettoyage.
Matériaux et méthodes
Préparation d'extraits de plantes brutes
Les plantes testées ont été collectées localement ou obtenues de la
Compagnie pharmaceutique Himalaya, New Delhi-15. Toute la plante
matériaux ont ensuite été identifiés par le ministère de la
Botanique, Université musulmane d'Aligarh (AMU), Aligarh.
Des spécimens de référence de ces plantes ont été déposés dans
département de microbiologie agricole, AMU, Aligarh.
Environ 800 g de matière végétale séchée et broyée ont été trempés
dans 2,5 l de méthanol à 98% pendant 8 à 10 jours, en remuant tous les 18 jours
h en utilisant une tige de verre stérile. L'extrait final a été passé
sur le papier filtre Whatman n ° 1 (Whatman Ltd.,
Angleterre). Le filtrat obtenu a été concentré sous
sous vide sur un évaporateur rotatif à 40 ºC et stocké à 4
¡C pour une utilisation ultérieure. L’extrait brut a été obtenu par
dissoudre une quantité connue d'extrait sec dans 98%
méthanol pour obtenir une solution mère de 40 mg / ml
concentrations.
Dosage d'antioxydant
L'activité antioxydante de chaque extrait de plante était
testé avec le thiocyanate ferrique (FTC) et
méthodes de l'acide thiobarbiturique (TBA). La méthode FTC était
utilisé pour mesurer la quantité de peroxyde au début
de peroxydation lipidique, dans laquelle le peroxyde va réagir avec
chlorure ferreux et forment des ions ferriques. Les ions ferriques seront alors
unir avec thiocyanate d'ammonium et produire ferrique
thiocyanate. La substance est rouge et la couleur plus dense est
indicatif d'une absorbance plus élevée. La méthode TBA
mesure les radicaux libres présents après l'oxydation du peroxyde.
a) Méthode au thiocyanate ferrique (FTC)
La méthode standard décrite par Kikuzaki et
Nakatani (12) a été utilisé. Un mélange de 4,0 mg de plante
extraire dans 4 ml d'éthanol absolu, 4,1 ml à 2,52%
acide linolénique dans l’éthanol absolu, 8,0 ml de 0,05 M
tampon phosphate (pH 7,0) et 3,9 ml d’eau ont été
placé dans un flacon avec un bouchon à vis, puis placé dans un endroit sombre
four à 40 ° C. 9,7 ml à 0,1 ml de cette solution ont été ajoutés
ml d'éthanol à 75% et 0,1 ml d'ammonium à 30%
thiocyanate. Précisément 3 min après l'ajout de 0,1 ml
de chlorure ferreux 0,02 M dans HCl à 3,5% à la réaction
mélange, l'absorbance de la couleur rouge a été mesurée à
500 nm toutes les 24 h jusqu'au lendemain de l'absorbance de
le contrôle a atteint son maximum. Hydroxytoluène butylé
(BHT) et ont été utilisés comme tocopherol contrôles positifs,
alors qu’un mélange sans échantillon de plante était utilisé comme
contrôle négatif.
b) Méthode à l'acide thiobarbiturique (TBA)
La méthode d'Ottolenghi (26) a été suivie. Deux
millilitres d'acide trichloroacétique à 20% et 2 ml de 0,67%
De l'acide 2-thiobarbiturique a été ajouté à 1 ml d'échantillon
solution préparée avec la méthode FTC. Le mélange
a été placé dans un bain d’eau bouillante et après refroidissement était
centrifugé à 3000 tr / min pendant 20 min. Absorbance de
le surnageant a été mesuré à 552 nm. Antioxydant
l'activité était basée sur l'absorbance le dernier jour de
la méthode FTC.
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
178
Essai de balayage des radicaux libres
L’activité de nettoyage des radicaux libres DPPH par
différents extraits de plantes ont été déterminés en fonction de la
méthode rapportée par Gyamfi (27). Cinquante microlitres du
extrait de plante dans du méthanol, donnant 100 µg / ml dans chaque
réaction, a été mélangé avec 1 ml de DPPH 0,1 mM dans
solution de méthanol et 450 µl de tampon Tris-HCl 50 mM
(pH 7,4). Du méthanol (50 µl) seulement a été utilisé comme
contrôle expérimental. Après 30 min d'incubation en chambre
température, la réduction du nombre de DPPH libre
les radicaux ont été mesurés en lisant l'absorbance à 517
nm. Le BHT et le ocop- tocophérol ont été utilisés comme témoins. le
le pourcentage d'inhibition a été calculé à partir des éléments suivants
équation:
% D'inhibition = [absorbance du contrôle Ð absorbance
de l' échantillon de test / Absorbance de contrôle] 100
Analyse phytochimique
Analyse phytochimique des principaux phytoconstituants
des extraits de plantes a été entreprise en utilisant la norme
méthodes qualitatives (tests de couleur et / ou CCM) telles que décrites
plus tôt (24).
Analyse du composé phénolique total
Les quantités de composés phénoliques dans l’indien sélectionné
extraits de plantes médicinales ont été déterminés avec Folin-
Réactif Ciocalteu selon la méthode de Spanos et
Wrolstad (28), modifié par Lister et Wilson (29). À
50 ml de chaque échantillon (3 répétitions), 2,5 ml de 10%
dilution du réactif Folin-Ciocalteu et 2 ml de Na 2 CO 3
(7,5%, p / v) ont été ajoutés et le mélange résultant a été
incubé à 45 ° C pendant 15 min. L'absorbance de tous
les échantillons ont été mesurés à 765 nm en utilisant un appareil Spectronic
20D + . Les résultats ont été exprimés en milligrammes d'acide gallique.
équivalent par gramme de poids sec (mg GAE / g ps).
Résultats et discussion
Espèces réactives de l'oxygène (ROS), des deux
sources endogènes et exogènes, peuvent être impliquées dans
les étiologies de diverses maladies humaines telles que
artériosclérose, lésion ischémique, cancer et
maladies neurodégénératives, ainsi que dans les processus
comme l'inflammation et le vieillissement (5,30,31). Il y a des preuves
que les antioxydants indigènes peuvent être utiles dans la prévention
les conséquences délétères du stress oxydatif et là
est de plus en plus intéressé par le biochimique protecteur
fonctions des antioxydants naturels contenus dans les épices,
herbes et plantes médicinales (32,33). Notre attention a
se sont concentrés, en particulier, sur les parties de 12
utilisé des plantes médicinales indiennes.
Les activités antioxydantes des extraits de plantes ont été
mesurée par la méthode FTC et comparée à la
Méthode TBA à une concentration de 0,02% en méthanol
solutions. Les extraits de plantes testés ont montré une faible
les valeurs d’absorbance, qui indiquaient un niveau élevé de
activité antioxydante. Aucun des extraits de plantes montrés
valeurs d'absorbance supérieures aux contrôles négatifs
(sans extraits de plantes) à la fin des deux méthodes,
indiquant la présence d'une activité antioxydante. cependant,
tous les extraits de plantes ont montré une forte activité antioxydante
tel que déterminé par les méthodes FTC et TBA,
surpassant l'activité du commercial standard
antioxydants, alpha-tocophérol et hydroxy butylé
toluène (figures 1 à 4).
Les extraits de Delonix regia (fleurs), Terminalia
bellerica (fruits), Terminalia chebula (fruits), Ocimum
sanctum (feuilles) et Camellia sinensis (feuilles) et certains
d'autres plantes ont exercé une bonne activité antioxydante par divers
méthodes. L'activité antioxydante détectée avec le TBA
la méthode était supérieure à celle détectée avec le FTC
méthode. Cela pourrait suggérer que la quantité de peroxyde
au stade initial de la peroxydation lipidique était inférieure à la
quantité de peroxyde au stade secondaire. En outre,
le produit secondaire était beaucoup plus stable pendant une période
de temps.
Les radicaux libres ont été impliqués dans de nombreuses maladies
conditions, les plus importantes étant les radicaux superoxydes,
les radicaux hydroxy, les radicaux peroxyle et l'oxygène simple.
Les médicaments à base de plantes contenant des agents anti-radicaux libres sont
gagner en importance dans le traitement de ces maladies. Beaucoup de plantes
extraits présentent des propriétés antioxydantes efficaces en raison de
leurs phytoconstituants, y compris les composés phénoliques (34). dans le
expérience actuelle, extraits méthanoliques de 12 plantes
ont été évalués pour leur activité de piégeage des radicaux libres
en utilisant le dosage radical DPPH. Réduction des radicaux DPPH
peut être observé par la diminution de l'absorbance à 516
nm. Différents extraits de plantes ont réduit les radicaux DPPH
significativement. Valeurs de pourcentage de décoloration de DPPH
Les radicaux sont indiqués dans le tableau 1. Sur les 12 plantes testées, 7
plantes, à savoir Mangifera indica, Punica granatum,
Terminalia bellerica, Terminalia chebula, Cichorium
intybus, Ocimum sanctum et Camellia sinensis ont montré
plus de 70% de décoloration. L'activité de Trigonella
foenum graecum (57%) était au pair par rapport à
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
179
les antioxydants commerciaux - tocophérol (58%) et
toluène butylé (49%), tandis que l'extrait de
Allium sativum a montré une activité négligeable.
Quelques variations dans l'étendue de l'extrait d'antioxydant
ont été observés pour chaque type de test utilisé dans ce
étude. Les extraits de Terminalia bellerica, Terminalia
chebula et Mangifera indica avaient un bon radical DPPH
activité de piégeage, mais faible peroxydation lipidique, tandis que le
extraits de Camellia sinensis, Cichorium intybus, et
Ocimum sanctum avait un potentiel antioxydant relativement élevé
selon la méthode FTC. Ces différences peuvent être
en raison de leurs différents mécanismes antioxydants; cependant,
dans certains des extraits de plantes ci-dessus, la substance active
les constituants sont connus, tels que l'acide gallique (T. chebula)
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
180
Journées
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Absorbance à 500 nm
0.0
0,1
0,2
0,3
0.4
0.5
0.6
Delonix regia
Allium sativum
Piper Cubeba
Mangifera indica
Trigonella f. graecum
Punica granatum
0 1 2 3 4 5 6 7 8
0
1
2
3
Contrôle négatif
BHT
- tocophérol
Figure 1. Propriétés antioxydantes d'extraits de plantes déterminées par la méthode FTC.
Journées
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Absorbance à 500 nm
0.0
0,1
0,2
0,3
0.4
0.5
0.6
Lawsonia inermis
Terminalia bellerica
Terminalia chebula
Camellia Sinensis
Cichorium intybus
Ocimum sanctum
0 1 2 3 4 5 6 7 8
0
1
2
3
Contrôle négatif
BHT
Ocop- tocophérol
Figure 2. Propriétés antioxydantes d'extraits de plantes déterminées par la méthode FTC.
et les catéchines (Camellia sinensis). Nos conclusions sur le
l'activité antioxydante des plantes médicinales en corrélation avec
rapports de tiers (19-23).
Une corrélation équitable entre le contenu phénolique total et
une activité antioxydante a été observée chez 9 des 12 plantes,
alors qu'aucune relation directe n'a pu être détectée dans Piper
cubeba, Lawsonia inermis et Trigonella foenumgraecum
extraits. Ces observations indiquent clairement une
lien étroit entre les composés phénoliques et l'activité antioxydante;
cependant, en raison de la diversité phytochimique du
composés phytocomposants antioxydants, la variation ci-dessus est
attendu.
L'analyse phytochimique des extraits bruts
a indiqué la présence de phytocomposés majeurs,
composés phénoliques, alcaloïdes, glycosides, flavonoïdes et
tanins (tableau 1), qui pourraient avoir été responsables de
l'activité antioxydante observée. Nos résultats plus loin
soutenir l'idée que certains Indiens utilisaient traditionnellement
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
181
Absorbance à 532 nm le dernier jour de la méthode FTC
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Delonix regia
Allium sativum
Piper Cubeba
Mangifera indica
Punica granatum
Trigonella f. graecum
BHT
Ocop- tocophérol
Eau
Figure 3. Activités antioxydantes des extraits de plantes déterminées par la méthode TBA.
Absorbance à 532 nm le dernier jour de la méthode FTC
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Lawsonia inermis
Terminalia bellerica
Terminalia chebula
Camellia Sinensis
Cichorim Intybus
Ocimum sanctum
BHT
Ocop- tocophérol
Eau
Figure 4. Activités antioxydantes des extraits de plantes déterminées par la méthode TBA.
les plantes médicinales sont des sources prometteuses de potentiel
les antioxydants. Une étude plus approfondie visera à isoler et à
identifier les substances responsables de l'antioxydant
activité des extraits de plantes, qui peuvent être exploités
dans des formulations à base de plantes.
Remerciements
Nous sommes reconnaissants au Dr. S. Farooq, Directeur du
Himalaya Drug Company, New Delhi, pour avoir fourni certaines
des matériaux végétaux et le président de la
Département de microbiologie agricole pour sa passion
intérêt pour ce travail. Nous sommes également reconnaissants à UGC, New
Delhi, pour un soutien financier sous forme de recherche majeure
projet n ° F.3-58 / 2002 (SR-II).
Auteur correspondant:
Iqbal AHMAD
Département de microbiologie agricole,
Université musulmane d'Aligarh,
Aligarh, 202002 - INDE
E-mail: iqbalahmad8@yahoo.co.in
Propriétés anti-oxydantes et anti-radicaux libres de douze plantes médicinales indiennes traditionnellement utilisées
182
Tableau 1. Activité de piégeage des radicaux libres des plantes médicinales indiennes, déterminée par la méthode DPPH, et teneur totale en phénol.
S. Nom de la plante / Famille Partie commune% Décoloration * Phytocomposés ** Total phénolique
Nom utilisé ± SD détecté contenu ± SD
1. Ampoule Allium sativum L. Lesan 7,97 ± 1,09 P, T 28,66 ± 2,52
(Alliaceae)
2. Camellia sinensis L. Feuilles de thé 69,95 ± 3,62 P, G, S 163,33 ± 7,37
(Theaceae)
3. Cichorium intybus L. Racines de chicorée 73,34 ± 4,87 A, P, F, G, T 76,83 ± 8,75
(Composée)
4. Delonix regia Gamble. Fleurs Gulmohar 71,93 ± 3,86 A, P, F, G 169,67 ± 11,23
(Légumineuses)
5. Lawsonia inermis L. Heena feuilles 67,67 ± 5,48 A, P, G, S 38,67 ± 4,51
(Lythraceae)
6. Mangifera indica L. Feuilles d'Aam 78,14 ± 3,63 F, G 135,00 ± 9,54
(Anacardiaceae)
7. Ocimum sanctum L. Feuilles de Tulsi 73,70 ± 5,87 P, G, S 80,00 ± 8,18
(Labiatae)
8. Piper cubeba L. Graines de chini Kabab 66,20 ± 3,20 P, F 42,83 ± 3,75
(Piperaceae)
9. Punica granatum L. Anar croûte 75,50 ± 3,90 A, P, F, G 122,00 ± 6,24
(Punicaceae)
10. Terminalia bellerica Roxb. Fruits Bahera 76,29 ± 3,06 P, F, G, S, T 111,67 ± 19,29
(Combretaceae)
11. Terminalia chebula Retz. Harir Fruit 85,36 ± 2,44 P, G, S 166,33 ± 18,01
(Combretaceae)
12. Trigonella foenum-graecum L. Feuilles de Methi 57,45 ± 2,44 A, F, G 74,33 ± 5,13
(Légumineuses)
13. BHT ---- ---- 49.28 ± 2.10
14. ocop- tocophérol ---- ---- 58,16 ± 4,13
* Clé Phytocomposés: A, Alcaloïdes; P, phénols; F, flavonoïdes; G, glycosides, S, saponines; T, tanins
** mg / g d'extraits de plantes sèches
F. AQIL, I. AHMAD, Z. MEHMOOD
183
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