الاثنين، 21 نوفمبر، 2016

علم الطفيليات

علم الطفيليات
تشخيص طفيلي الملاريا
تعد الملاريا من الأمراض الخطيرة، وفي بعض الأحيان تسبب الوفاة الناجمة يسببه الإصابة بطفيلي المتصورة وينتقل إلى الإنسان عن طريق لدغات بعوض الأنوفيليس الحامل له. وينبغي أن يؤكد التشخيص السريري، حينما يشتبه بالملاريا استنادًا إلى السوابق، دائمًا الأعراض والنتائج السريرية عن طريق التشخيص المختبري.
يتضمن التشخيص المختبري للملاريا تحديد الطفيلي المسبب للملاريا أو مستضداتها / تكاثرها في دم المريض.
الأهمية السريرية
عادةً ما يتم اكتشاف الطفيليات المسببة للملاريا في أفلام الدم المصبغة بصبغة فيلد أو جيمسا. كما يمكن اكتشافها أيضًا باستخدام إجراءات مناعية معروفة باسم اختبار الغميسة
من الأهمية بمكان تشخيص وعلاج المرض الذي ينطوي على أنواع يتم اكتشافها في المختبر.

تحضير فلم دم سميكة ورقيق على الشريحة نفسها
هناك أربعة أنواع من المتصورات الجنسية المسؤولة عن الإصابة بطفيلي الملاريا التي تصيب الإنسان عادة، المتصورة المنجلية والمتصورة النشيطة والمتصورة الوبالية والمتصورة البيضوية.  وتعد المتصورة المنجلية أكثر هذه الطفيليات أهمية نظرًا لأنه قد تكون مميتة سريعًا ومسؤولة عن غالية أمراض الملاريا المسببة للوفاة

الأهمية السريرية
وينبغي أن يؤكد التشخيص السريري، حينما يشتبه بالملاريا استنادًا إلى السوابق، دائمًا الأعراض والنتائج السريرية عن طريق التشخيص المختبري. يستخدم الفلم السميك للكشف عن الطفيليات، بينما يستخدم الفلم الرقيق في تحديد أنواع الطفيليات

القاعدة
عادة ما يتم جمع عينات الدم المقرر فحصها لمعرفة طفيليات الملاريا في مركز صحي.
ويعد الوقت الأكثر ملائمة لجمع العينة وقت ذروة نوبة الحمى، عندما تكون الطفيليات أكثر عددًا في الدم. وينبغي دائمًا جميع عينات الدم قبل تناول أيّ أدوية مضادة للملاريا. وينبغي تنظيف الأصبع قبل أخذ عينة دم شعيري باستخدام واخزة لثقب آلية الأصبع
الطريقة
1. عندما يرفع المريض راحة اليد اليسرى لأعلى، يحدد الأصبع الثالث أو الرابع. (يمكن استخدام أصبع القدم الكبير مع الأطفال الرضع. ولا ينبغي قط استخدام أصبع الإبهام مع البالغين أو الأطفال). ويستخدم قطن طبي مغمور في الإيثانول لتنظيف الأصبع برفق — ويستخدم بقوة لإزالة الأوساخ والقذارة من آلية الأصبع، يجفف الأصبع بقطعة نظيفة من القطن الطبي (ضمادة كتانية).
2. لتعقيم الواخزة، المستخدمة في ثقب آلية الأصبع، من خلال تغليفها بسرعة. وعن طريق الضغط اللطيف على الإصبع، تخرج أول قطره دم ويتم إزالتها بقطعة قطن طبي جافة.  ينبغي التأكد من عدم وجود أيّ خيوط من القطن الطبي على الإصبع
3. استخدام شرائح نظيفة وإمساكها من الحواف فقط، وتجمع عينة الدم على النحو التالي:
       يضغط ضغطًا خفيفًا على الأصبع ويؤخذ قطرة دم صغيرة، بحجم_ هذه تقريبًا، على منتصف الشريحة. هذا بالنسبة لفلم الدم الرقيق.
       يضغط مزيدًا من الضغط على الإصبع لخروج مزيدًا من الدم ويؤخذ قطرتين أو ثلاث قطرات أكبر، بحجم هذه _ تقريبًا، على شريحة يبلغ طولها 1 سم من القطرة المخصصة للشريط الرقيق. يمسح الدم المتبقي بقطن طبي.
فلم رقيق:باستخدام شريحة أخرى نظيفة "كفارشة" ومن خلال الشريحة المحتوية على قطرات الدم المرتكزة على سطح مسطح وثابت، قم بلمس القطرة الصغيرة بالفارشة واسمح للدم بالانزلاق على طول حواف الشريحة. ثم قم بدفع الفارشة بقوة على طول الشريحة بعيدًا عن القطرات الأكبر حجمًا مع الحفاظ على ميل الفارشة بزاوية 45 درجة وتأكد من تلامس الفارشة بشكل متساوٍ مع سطح الشريحة طوال الفترة التي يتم فيها نشر الدم.
فلم سميك:استخدم الشرائح دائمًا من خلال الحواف أو من خلال أحد الزوايا لجعل الفلم السميك كالتالي: باستخدام زاوية الفارشة، قم بسرعة بضم قطرات الدم الأكبر حجمًا وقم بنشرها لعمل فلم سميك متساوٍ واسمح للفلم السميك بالجفاف في مكان مسطح ومستوٍ ومحمي من الحشرات والغبار والحرارة الشديدة. ثم قم بوضع ملصق على الفلم الجاف باستخدام قلم رصاص شحمي من خلال كتابة اسم المريض ورقمه وتاريخه عبر الجزء الأكثر سماكة من الفلم الرقيق.
المواد والكواشف
       مجهر
       شرائح مجهر زجاجية نظيفة
       مباضع دم معقمة
       قطن طبي
       قلم رصاص شحمي
       ميثانول
       70 % إيثانول.
       أسطوانات قياس حجم 10 و50 و100 مل
       دوارق بحجم 50 و250 مل
       تُرُف الصباغة       
       قضبان زجاجية
       قارورة غسل
       ملاقط شرائح
       رفارف الشرائح
       مُوَقِّت
       صبغة جيمسا
       ميثانول في زجاجة قطرات
       ماء منظم أو pH 7.2 أو ماء مقطر
صباغة أفلام الدم بصبغة جيمسا
القاعدة
أثناء صباغة فلم الدم، يعمل الهيموغلوبين الموجود في كريات الدم الحمراء على إذابة (عملية نزع الهيموغلوبين) وتتم إزالته بواسطة الماء الموجود في محلول الصبغ. جميع هذه البقايا هي طفيليات وكريات دم بيضاء يمكن رؤيتها تحت المجهر.
الطريقة الأولى:طريقة سريعة لصبغ أفلام الدم السميكة والرقيقة
هذه الطريقة مناسبة لصباغة الأفلام السميكة بسرعة عند الحاجة إلى نتائج مستعجلة.ويستخدم فيها صبغة أكثر من الطريقة العادية
1. باستخدام الملاقط، ضع الشرائح على التوالي في ترفة صبغ
2- جهز محلول جيمسا بنسبة 3% في ماء منظم أو ماء مقطر، pH 7.2، في كمية كافية لملء عدد ترف الصباغة المستخدمة ثم امزج الصبغة جيدًا.
3- صب الصبغة بلطف في أوعية الصباغة حتى تغطى جميع الشرائح بالكامل. بحيث تتعرض للصبغة لمدة تتراوح من 30 إلى 45 دقيقة بعيدًا عن ضوء الشمس.
4. صب ماءً نظيفًا بلطف في الوعاء لإزالة الرواسب الموجودة على سطح محلول الصباغة
5. ثم قم بتفريغ الصبغة المتبقية بلطف)، واشطف مرة أخرى في ماء نظيف لثوانٍ قليلة. ثم قم بتفريغ الماء.
الطريقة الثانية
1. إذا كانت هناك حاجة إلى النتائج بصورة ملحة، يترك الفلم السميك ليجف تمامًا، ويمكن تسريع عملية التجفيف من خلال تعريض الشريحة لمروحة أو تعريض الشريحة لفترة وجيزة لحرارة لطيفة مثل التي تصدر عن مصباح المجهر. وينبغي توخي الحذر لتجنب الحرارة الزائدة، وإلا سيتم تثبيت الفلم السميك بالحرارة
2. ثبت الفلم الرقيق من خلال إضافة ثلاث قطرات من الميثانول أو من خلال غمسه في وعاء إيثانول لثوانٍ قليلة. وللسماح بعملية نزع الهيموغلوبين، يتعين عدم تثبيت الفلم السميك، ومن ثم تجنب تعرض الفلم السميك للميثانول أو بخار الميثانول
3. جهز محلول جيمسا بنسبة 10% في ماء منظم أو ماء مقطر، pH 7.2؛ وإذا تم استخدام كمية قليلة، سوف تعطي ثلاث قطرات من الصبغة لكل مل من الماء المنظم التركيز الصحيح لمحلول جيمسا. تحتاج الشريحة الواحدة حوالي 3 مل من الصبغة المعدة. امزج الصبغة جيدًا باستخدام قضيب زجاجي.
4. صب الصبغة بلطف على الشرائح أو استخدم أنبوب ممص. بحيث تتعرض للصبغة لمدة تتراوح من 5 إلى 10 دقائق
5. اغسل الشرائح من الصبغة بلطف من خلال إضافة قطرات من الماء النظيف. لا تقم بإزالة الصبغة ثم الغسل حيث أن هذا سيترك رواسب من الغثاء فوق اللطاخات.

6. ضع الشرائح في رفرف الشرائح لنزح وتجفيف، مع اتجاه جانب الفلم لسفل، الشرائح من أعلى إلى أسفل، وتأكد من أن الفلم لا يلمس رف الشرائح.

فحص مجهري
افحص الشريحة تحت المجهر باستخدام تكبير بمعدل ¥100 تكون طفيليات الملاريا الموجودة في الدم في مراحل مختلفة من التطور ويكون لدى بعض طفيليات الملاريا حبيبات صباغية في هيولى خلاياها
أفلام الدم الرقيقة: في أفلام الدم الرقيقة، قد تبقى كريات الدم الحمراء المصابة غير متغيرة أو لديها ألوان وأشكال مختلفة أو قد تحتوي على بقع ("شوفنر") القرنفلية أو بقع ("جيمس") الحمراء ويمكن استخدام الأفلام الرقيقة للتعرف على عينات طفيليات الملاريا
ملاحظة: يمكن رؤية الوحيدات، في المرضى الذين يعانون من الملاريا لفترة طويلة، في فلم الدم الرقيق وغالبًا ما تحتوي خلايا الهيولى على أجسام بنية أو سوداء تميل إلى الخضرة (أليفات الحديد). وبالنسبة للمرضى الذين تلقوا حقن بعقار مضاد للملاريا، تصبغ الطفيليات العينة بصبغة ذات لون بسيط وتبدو مشوهة وغير واضحة.
أفلام الدم السميكة: في أفلام الدم السميكة، يتعين أن تكون الخلفية نظيفة وخالية من الحطام حيث أن كريات الدم الحمراء تذوب. ويتعين أن يكون لدى طفيليات الملاريا كروماتين أحمر غامق أو هيولى أزرق أو أزرق ضارب إلى الأرجواني الباهت. في الأفلام السميكة المصبوغة بجيمسا، يتعين أن تكون نواة كريات الدم البيضاء مصبوغة بلون أرجواني غامق. ويمكن رؤية بقع شوفنر حول طفيليات الملاريا. ويتم استخدام أفلام الدم السميكة لتقدير الكثافة الطفيلية كما هو موضح أدناه.
نتائج التقرير
إذا كانت نتيجة فحص أفلام الدم المصبوغة موجبة، حدد:
       عينات الطفيليات المكتشفة
       مرحلة تطور الطفيليات
       الكثافة الطفيلية.
قد تحتوي أفلام الدم المحتوية على المتصورات البيضاوية والمتصورات النشيطة على طفيليات قليلة ومن ثم تستغرق مزيدًا من الوقت للفحص تحت المجهر. ومع ذلك من الضروري التمييز بين النوعين، حيث يقد يظهران مرة أخرى في الدم بدون عودة العدوى.
ويحتاج المرضى المصابين بمتصورات الملاريا البيضاوية والمتصورات النشيطة إلى علاج إضافي للقضاء على المراحل الكبدية من هذه الطفيليات.
‎‎يمكن لمريض واحد استضافة أكثر من نوع واحد من طفيليات الملاريا في نفس الوقت (على سبيل المثال المتصورات المنجلية ومتصورات الملاريا أو المتصورات المنجلية والمتصورات النشيطة). وإذا كانت النتيجة سلبية يقدم تقرير "بعدم اكتشاف طفيليات".          
‎‎ المتصورة المنجلية
‎‎1:‎‎ خلايا حمراء طبيعية، من 2 إلى 18: أتاريف (من بين هذه)، ومن 2 إلى 10: متوافقة مع الطور الحلقي من الأتاريف، ومن 19 إلى 26: متقسمات (26 متقسمة منفتقة) و27 و28: سليفات العرسية الكبروية الناضجة و29 و30:عرسية مكروية (ذكر)‎‎

المتصورة البيضاوية
‎‎1:‎‎ خلايا حمراء طبيعية، من 2 إلى 5: أتاريف صغيرة (حلقات)، ومن 6 إلى 15: أتاريف، ومن 16 إلى 23: متقسمات، و24:سليفات العرسية الكبروية (أنثى)، 25: عرسية مكروية (ذكر)‎‎

المتصورة النشيطة‎‎
1: خلايا حمراء طبيعية، من 2 إلى 6: أتاريف صغيرة (طفيليات في الطور الحلقي)، ومن 7 إلى 18: أتاريف، ومن 19 إلى 27 متقسمات، و28 و29:سليفات العرسية الكبروية (أنثى)، و30: عرسية مكروية (ذكر)‎‎


ليست هناك تعليقات:

إرسال تعليق